流式管(流式管架)--考研网

流式管，流式管架

在上篇文章中小编已经为大家简单介绍了流式细胞仪以及应用，本篇内容为大家介绍一下流式细胞仪的常规检测实验，为大家更好的使用这个技术以及更好的进行科研工作做出建议和分享。

一、细胞周期检测

1.实验原理

细胞周期（Cell Cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）。

流式细胞仪PI染色法检测细胞周期的原理：由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N) ,而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0 期,S 期和G2/M 期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率（如图所示）。

2.检测样本要求等

（1）检测范围：已固定或未固定的单细胞悬液、新鲜组织

（2）样本形式：预冷的70%酒精固定的单细胞悬液或者新鲜组织

（3）样本量：每个样本不少于106个细胞

（4）检测时限：预冷的70%酒精固定的单细胞悬液一周内均可检测，未固定的新鲜细胞或组织2h内检测。

（5）前处理：细胞固定：每106个细胞加入500ul预冷的70%酒精，4℃2h。

3.实验步骤：

（1）用PBS洗涤细胞一次（离心2000rpm，5min）收集并调整细胞浓度为1×106/ml；

（2）制备的单细胞悬液用体积分数为70％乙醇固定，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液；

（3）将RNase A 与PI 1:9混匀，每个样本加入250ul，室温避光30min；

（4）上机检测，记录激发波长488nm 处红色荧光。4. 结果示例：

4.实验结果示例

二、细胞凋亡

1.实验原理

正常细胞的表面由不对称分布在质膜内叶和外叶上的脂质组成。这些脂质之一磷脂酰丝氨酸（PS），通常仅分布于质膜的内叶，因此仅暴露于细胞质中。然而，在细胞凋亡过程中，脂质不对称性消失并且PS暴露在质膜的外部小叶上。Annexin V是一种36 kDa的钙依赖性的磷脂结合蛋白，能够与PS结合。因此，荧光标记的Annexin V可用于检测暴露于早期凋亡细胞外部的PS，但是Annexin V就无法区分坏细胞死（中晚期凋亡细胞）和早期凋亡细胞。因此，通过与碘化丙啶（PI）共染色，可以将凋亡细胞与坏死细胞（中晚期凋亡细胞）区分开，因为早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整，PI能进入坏死细胞（中晚期凋亡细胞）但是被早期凋亡细胞排除在外。